Een van de oorspronkelijke bierbrouwers uit Twente was Peter Cuyper, schoonzoon van Neerfeldt, die in 1676 tot meester van het Grolsche brouwgilde werd benoemd. Cuyper overleed in 1684, waarna zijn nakomelingen het bedrijf voortzetten. Tot 1876 werd h Lees verder
Een van de oorspronkelijke bierbrouwers uit Twente was Peter Cuyper, schoonzoon van Neerfeldt, die in 1676 tot meester van het Grolsche brouwgilde werd benoemd. Cuyper overleed in 1684, waarna zijn nakomelingen het bedrijf voortzetten. Tot 1876 werd het bier gebrouwen in de binnenstad van Groenlo. In dat jaar bouwde brouwerij 'De Klok' een nieuwe brouwerij buiten de grachten. In 1895 werd die gekocht door Theo de Groen, telg uit een Zevenaarse brouwersfamilie.
Op 3 mei 1922 fuseerde Brouwerij De Klok uit Groenlo met de Twentse Enschedesche Stoombierbrouwerij uit Enschede. Het bedrijf ging verder onder de naam "N.V. Bierbrouwerij De Klok Enschede-Groenlo". Later veranderde de naam in Grolsche Bierbrouwerijen en werd het bier 'Grolsch' genoemd.
Ten behoeve van de koeling tijdens de zomer werd decennialang 's winters ijs uit de Grolse gracht gehakt en in geïsoleerde kelders bewaard. Het bier werd met paard en wagen vervoerd, waardoor het bereik zo'n veertig kilometer bedroeg. Eind 1945 werden de eerste vrachtwagens gekocht voor transport. Tot 1950 werd ook gebruikgemaakt van treinen, met speciale koelwagons. In 1946 startte de export naar onder andere Suriname, Curaçao, India en China, maar door sterk toenemende binnenlandse vraag werd hiermee snel gestopt.
Vanaf de jaren 1920 werd er ook limonade geproduceerd onder de naam 'Groli'. De limonadefabriek bleek winstgevend en groeide gestaag, totdat ze in 1972 afbrandde en de directie besloot niet te herbouwen.
Het bedrijf was van 1984 tot 2008 beursgenoteerd. Een groot deel van de aandelen was in handen van de familie De Groen. Deze familie heeft het bedrijf vanaf 1968 opgewerkt van lokale bierbrouwerij tot een internationaal bedrijf. In 1995 kreeg de brouwerij het predicaat Koninklijk.
Tot 2004 werd Grolsch in Groenlo en in Enschede gebrouwen. Sinds 2004 zijn die beide vestigingen gesloten en staat er een nieuwe brouwfabriek in Usselo (gemeente Enschede), op de grens met Boekelo. In november 2007 deed de van oorsprong Zuid-Afrikaanse bierbrouwer SABMiller een overnamebod op Grolsch. SABMiller was bereid in totaal € 816 miljoen te betalen ofwel € 48,25 per aandeel en het bod lag ongeveer 84% boven de beurskoers.[2] Familie De Groen, het bestuur en de raad van commissarissen van Grolsch gingen akkoord.
Sinds 2009 is de brouwerij een van de 135 brouwerijen van SABMiller.[3] In november 2015 maakte SABMiller bekend dat het Grolsch wil verkopen in aanloop naar de overname door AB InBev.[4] In april 2016 accepteerde AB InBev het bod van het Japanse Asahi om Grolsch (en Peroni en Meantime) over te nemen.